세상은 녹차녹차해-

l sample preparation 1. sample은 같은 buffer 에 dialysis 시킨다. phosphate buffer가 좋으며 beta-mercaptoethanol 이나 DTT가 들어가면 안됨. - 2시간, O/N two step으로 진행 2. ligand는 dialysis 시킨 buffer에 녹여야 buffer에 의한 열의 변화를 무시할 수 있다. 3. ligand의 농도는 protein sample의 10배는 되어야 한다. l ITC protocol - 모든 buffer는 완전히 degassing 해서 사용 - TDW, buffer, 킴테크, waste 통 준비 - 단계마다 loop을 DW로 잘 씻을 것 - loading시 loop의 끝 부분이 바닥에 닿기 직전까지만 넣고 loadin..

Summary The following technique can be used to easily move any piece of DNA from one vector to another as long as it is already bounded by restriction sites that are also present in the same orientation on your target vector. If you are not sure what vector to use, you can check out our Empty Backbone Reference. Background Subcloning by restriction digest is a commonly used lab technique. For th..

출처: http://openwetware.org/wiki/E._coli_genotypes Nomenclature & Abbreviations A listed gene name means that gene carries a loss of function mutation, a Δ preceding a gene name means the gene is deleted. If a gene is not listed, it is not known to be mutated. Prophages present in wt K-12 strains (F, λ, e14, rac) are listed only if absent. E. coli B strains are naturally lon- and dcm-. F- = Does ..

출처: https://www.embl.de/pepcore/pepcore_services/cloning/choice_vector/ecoli/vectorfeatures/ Choice of Vector - E.coli Vectors - Vector Features - EMBL The basic architecture of an E. coli expression vector is shown in the figure below and contains the following features: Selectable marker. In the absence of selective pressure plasmids are lost from the host. Especially in the case of very high ..

분자생물학 기반의 거의 모든 바이오 연구실에서는 vector에 원하는 target gene을 삽입할 일이 비일비재합니다. 이 때 target gene에 restriction enzyme의 cleavage site를 넣기 위해 polymerase chain reaction(PCR)을 진행하는데, 아래는 PCR에서 사용하는 primer 제작 단계입니다. Forward primer와 Reverse primer 각각에 서로 다른 restriction enzyme cleavage site를 넣고, sticky end를 만드는 restriction enzyme을 이용한다는 가정을 하겠습니다. (PCR이나 제한효소, primer 관련 기초 지식은 구글에 검색하시면 매우 많이 나옵니다.) 1. 먼저 cloning에 사..