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M9 medium recipe for Se-Met substitution

Medium for Se-Met substituttion (per litre) -10X M9 medium: 100 ml + DW (autoclave) => Autoclave 후 아래 물질들을 filter로 멸균한 후 추가로 첨가 -100X trace elements solution: 10 ml (filter) -20% (w/v) Glucose : 30 ml (filter) -1M MgSO4 : 1 ml (filter) -1M CaCl2: 0.3 ml (filter) -thiamin (1mg/ml) : 1ml (물에 잘 안 녹음, filter 하지 말고 suspension 상태로 넣기) - Amino acid 각 100 mg씩 --------------------------------------------..

Study/생명과학 2020.06.15

ultra-centrifuge (optima L-100K) 사용 방법

1. 준비한 sample 무게를 소수둘째자리까지 맞춰 balance 맞게 rotor 안에 넣는다. (sample을 90% 이상 채워야 통이 찌그러지지 않음) 2. 기기전원을 켜고 rotor를 장착한다. 3. Rotor rid의 나사부분과 O-ring에 grease를 살짝 바른 후 rotor를 닫는다. 4. Door를 닫고 원하는 speed, time, temperature 값을 각각 입력해서 setting한다. (50,000rpm, 1h, 4도씨) 5. accel과 decel을 max로 설정한 후 start 6. Vacumn이 완전히 걸리는지 확인(세 단계에 걸쳐서 이루어짐) 7. Rotor가 완전히 멈추면 vacuum을 누른 후, door를 열고 rotor rid를 연다. 8. 기기 전원을 끄고 doo..

Study/생명과학 2020.06.15

TA nano ITC (Isothermal titration calorimetry) protocol

l sample preparation 1. sample은 같은 buffer 에 dialysis 시킨다. phosphate buffer가 좋으며 beta-mercaptoethanol 이나 DTT가 들어가면 안됨. - 2시간, O/N two step으로 진행 2. ligand는 dialysis 시킨 buffer에 녹여야 buffer에 의한 열의 변화를 무시할 수 있다. 3. ligand의 농도는 protein sample의 10배는 되어야 한다. l ITC protocol - 모든 buffer는 완전히 degassing 해서 사용 - TDW, buffer, 킴테크, waste 통 준비 - 단계마다 loop을 DW로 잘 씻을 것 - loading시 loop의 끝 부분이 바닥에 닿기 직전까지만 넣고 loadin..

Study/생명과학 2020.06.15
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